一、方法 三浦あかね最新番号

  《GB4789.4-2016 食物安寰宇度方法 食物微生物学纯属 梵衲氏菌纯属》

二、梵衲氏菌简介

  梵衲氏菌为肠杆菌科的无芽孢革兰氏阴性杆菌，多数有鞭毛，能源强，可引起食物中毒，常存在于蛋类食物或受到粪便欺侮的食物中。梵衲氏菌属种类繁荣，超过了2000个菌型，名义的抗原较为复杂，生化反馈特征也存在各别。按照生化反馈特征，GB4789.4中将其主要辩认为6个生化群。大多数梵衲氏菌不发酵乳糖、赖氨酸脱羧酶阳性、产硫化氢、发酵葡萄糖产酸产气、尿素酶本质阴性，也有少数梵衲氏菌能发酵或逐步发酵乳糖（亚利桑那梵衲氏菌），不产硫化氢（甲型副伤寒梵衲菌、部分猪霍乱梵衲氏菌等）。

三、梵衲氏菌选用性分离培养

  1.样品惩办和预增菌

  无菌操作取25g样品加入至含225mL的BPW均质袋、均质杯或合乎的容器中混匀，36±1℃培养8-18h。

  精致事项：若纯属样品有敏感棱角或硬块时，使用均质袋有粗疏漏液风险，宜接受均质杯或其他容器进行惩办。

  2.选用性增菌

  分别取1mL的BPW增菌液加入至10mL的SC和TTB培养基中，SC置于36±1℃培养18-24h，TTB置于42±1℃培养18-24h。

  精致事项：（1）方法中选用了两种培养基进行选用性增菌培养，办法是为了顺应多种梵衲氏菌的滋长，缩小漏检率，必须两种培养基同期使用；（2）SC培养温度是36±1℃，而TTB的培养温度是42±1℃，必须严格按照参考的方法中章程的温度进行培养。细目可参考SC培养基旨趣及状态和TTB培养基旨趣及状态。

  3.选用性分离

  这一步是纯属流程中至关遑急的一步，梵衲氏菌种类繁荣，生化反馈和滋长特征也有所不同，即使在统一种选用性分离平板上也有多种菌落形态。方法中条件使用亚硫酸铋琼脂，再从XLD、HE和显色培养基至少选用一种培养基。同期使用两种不同的培养基，亦然为了赞助检出率。

  （1）亚硫酸铋琼脂

  方法中梵衲氏菌菌落特征面目：菌落为玄色有金属光芒、棕褐色或灰色，菌落周围培养基可呈玄色或棕色；有些菌株形成灰绿色的菌落，周围培养基不变。

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  亚硫酸铋琼脂倾向于分离伤寒类梵衲氏菌，典型的梵衲氏菌可在亚硫酸铋琼脂上滋长邃密，产硫化氢的梵衲氏菌菌落频繁为玄色，并有金属光芒，周围培养基可呈现玄色或棕色；不产硫化氢的梵衲氏菌菌落频繁为灰绿色，周围培养基不变色。部分肠杆菌在此培养基上有幽微滋长，菌落频繁为灰绿色，也有少数产硫化氢的细菌菌落呈玄色有金属光芒，与典型梵衲氏菌特征访佛，对可疑菌落的挑选酿成烦躁。

  伤寒梵衲氏菌在BS平板上36±1℃培养40h，菌落呈黑褐色，周围变棕色，菌落有金属光芒。

BS平板-伤寒梵衲氏菌CMCC50071

  亚利桑那梵衲氏菌在BS平板上36±1℃培养40h，菌落呈亮玄色，有金属光芒，菌落周围变棕色。

BS平板-亚利桑那梵衲氏菌CMCC47001

  甲型副伤寒梵衲菌（不产硫化氢）在BS平板上36±1℃培养40h，菌落呈灰绿色，无金属光芒，菌落周围不变色。

BS平板-甲型副伤寒梵衲菌CMCC50093

  在BS平板上挑取可疑菌落时，优先挑取玄色带金属光芒菌落，其次再挑选灰绿色菌落。

  精致事项：BS平板要素较不褂讪，应按照方法第一天配制，第二天神用，扬弃时代不超过48h，存放时代过长会影响培养基使用后果。细目可参考BS旨趣及使用门径和BS平板配制后不同使用时代办法菌的滋长对比。

 （2）木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂（XLD）

  培养基简介：XLD培养基中含有铁盐和硫酸盐，产硫化氢的细菌可复原硫酸盐生成硫化氢，与铁盐反馈生成玄色物资，使菌落带有玄色中心；培养基中含有少许的木糖及较多的蔗糖和乳糖用于细菌糖代谢初步判断，不可发酵乳糖或蔗糖的细菌频繁呈无色或红色，能发酵乳糖或蔗糖的细菌呈黄色。

  方法中梵衲氏菌菌落面目：菌落呈粉红色，带或不带玄色中心，有些菌株可呈现大的带光芒的玄色中心，或呈现一起玄色的菌落；有些菌株为黄色菌落，带或不带玄色中心。

  梵衲菌在XLD上大概可分为四种形态：①菌落呈无色或红色，中心带玄色或全黑；②菌落呈无色或红色，不带玄色中心；③黄色菌落，带玄色中心；④黄色菌落，不带玄色中心。

  形态①：菌落呈无色或红色，中心带玄色或全黑。

XLD-鼠伤寒梵衲氏ATCC14028 XLD-肠炎梵衲氏菌CMCC50760

  

  多数梵衲氏菌可产硫化氢，不分解乳糖和蔗糖，在XLD平板上菌落呈现无色或红色，有玄色中心（如图鼠伤寒梵衲氏菌）。部分梵衲氏菌可分解XLD培养基中的少许木糖产酸，赖氨酸脱羧反馈逐步，培养早期可不雅察到菌落周围稍许偏黄（如图肠炎梵衲氏菌），培养后期分解赖氨酸产碱可使菌落周围变回红色。一些产硫化氢的其他菌属可在此培养基上滋长，菌落有玄色中心，为常见烦躁菌。

  形态②：菌落呈无色或红色，不带玄色中心。

XLD-甲型副伤寒梵衲菌CMCC50093

  少数梵衲氏菌不产硫化氢，不发酵乳糖，在XLD平板上36℃培养18-24h后菌落呈无色或红色，无玄色中心。志贺氏菌属与不产硫化氢、乳糖阴性的梵衲氏菌访佛，在XLD平板上也呈现为无色或红色，无玄色中心的菌落。XLD平板也用于志贺氏菌的选用性分离培养，不产硫化氢的梵衲菌与志贺氏菌形态相配相通，互为烦躁菌。假单胞菌属、产碱杆菌属等在XLD上也为无色或淡红色透明菌落，一般通过三糖铁本质不错摈斥。

  

  形态③：黄色菌落，有玄色中心；：黄色菌落，无玄色中心。

XLD-奇异变形杆菌CMCC49005 XLD-大肠埃希氏菌ATCC25922 

  

  细菌分解培养基中的乳糖或蔗糖产大量酸，菌落显黄色。梵衲氏菌中，唯有部分亚利桑那梵衲氏菌可径直分解乳糖产酸。一些细菌可产硫化氢，在菌落中心呈现玄色。但若细菌产酸过多，无意会滋扰硫化氢与铁盐反馈，因此一些产硫化氢的细菌在XLD上部分菌落无玄色中心，需要通过三糖铁琼脂进行判断。

  部分可径直发酵乳糖的亚利桑那梵衲氏菌在XLD平板上菌落呈黄色，有或无玄色中心（乳糖逐步发酵型的亚利桑那梵衲氏菌菌落仍是显无色或红色，有玄色中心）。大肠菌群、畴前变形杆菌等发酵乳糖或蔗糖的细菌在XLD平板上菌落也呈黄色，有或无玄色中心，为常见烦躁菌。

  在XLD平板上进行可疑菌落第取时，优先级法例为：有玄色中心的红色或无色菌落＞无玄色中心的红色或无色透明菌落＞有玄色中心的黄色菌落＞无玄色中心的黄色菌落。细目参考XLD培养基本质旨趣及状态。

 （3）HE琼脂

  HE琼脂与XLD琼脂的配方和旨趣相通，本质状态也与XLD基本一致，因此在骨子检样时，HE与XLD选一种即可。

HE-鼠伤寒梵衲氏菌ATCC14028 HE-甲型副伤寒梵衲菌CMCC50093 HE-奇异变形杆菌CMCC49005  HE-福氏志贺氏菌ATCC12022 HE-畴前变形杆菌ATCC13315 HE-大肠埃希氏菌ATCC25922

  典型梵衲氏菌在HE平板上呈无色或蓝绿色透明菌落，有玄色中心；不产硫化氢的梵衲氏菌在HE平板上呈无色或蓝绿色透明菌落，无玄色中心；少数可发酵乳糖的亚利桑那梵衲氏菌在HE平板上显橙黄色菌落，有或无玄色中心。

  在HE平板上挑取可疑菌落优先法例为：无色或淡绿色透明，玄色中心菌落＞无色或淡绿色透明菌落＞黄色带玄色中心菌落。

  细目参考HE琼脂旨趣及状态。

 （4）梵衲菌显色培养基

  HE、XLD等传统培养基主若是依照梵衲氏菌的生化反馈来进行筛选，部分梵衲菌落特征不典型及受多种肠说念菌烦躁，检出率较低，易出现漏检。梵衲菌显色培养基旨趣与传统培养基不同，接受的是酶-底物法进行筛选，特异性高，适用鸿沟广，抗烦躁强。非凡是纯属中遭受不产硫化氢等非典型的梵衲氏菌时，显色培养基比传统培养基检出率高许多。 

  接洽梵衲氏菌细目参考梵衲氏菌显色培养基先容。

  在梵衲菌显色培养基上，梵衲氏菌菌落显紫色或紫红色。

鼠伤寒梵衲氏菌ATCC14028 甲型副伤寒梵衲菌CMCC50093

  变形杆菌属、志贺氏菌属等不发酵乳糖的细菌菌落呈无色、白色或灰色。

奇异变形杆菌CMCC49005 福氏志贺氏菌ATCC12022

  能发酵乳糖的大肠菌群菌落呈蓝色或蓝绿色。

大肠埃希氏菌ATCC25922

四、记忆

  1、样品惩办、增菌、分离培养时，需严格进行无菌操作，败北外来欺侮；

  2、培养基的培养温度、时代需严格按照方法章程实施；

  3、进行可疑菌落挑选时，优先中式典型菌落，其次再选用非典型菌落，多种培养基纠合使用，可赞助检出率。

  注：本文属海博生物原创，未经允许不得转载。

 

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